🧪Entregables
Como parte de este workshop, cada participante recibirá un tubo de cellular reagent preparado a partir de E. coli BL21 que expresan la enzima OpenVent-mCherry.
Escherichia coli BL21 (DE3)
Escherichia coli BL21 (DE3) es una cepa de laboratorio ampliamente utilizada en biología molecular y biotecnología para la expresión de proteínas recombinantes.
Pertenece a la familia de cepas derivadas de E. coli B, seleccionadas por su rápido crecimiento y baja actividad de proteasas, lo que ayuda a evitar la degradación de proteínas producidas.
El sufijo DE3 indica que en su genoma lleva integrado el gen de la ARN polimerasa T7 bajo control del promotor lac, lo que permite la expresión eficiente de genes clonados en plásmidos con promotores T7.
Es considerada segura para uso en docencia e investigación, pues está clasificada como organismo de nivel de bioseguridad 1 (BSL-1).
OpenVent
OpenVent es una polimerasa de ADN termoestable desarrollada en el marco de iniciativas de ciencia abierta, con el objetivo de ofrecer alternativas accesibles a las enzimas comerciales utilizadas en biología molecular.
Se trata de una variante de la enzima Vent DNA polimerasa, originalmente aislada de la arquea Thermococcus litoralis, caracterizada por su alta fidelidad en la síntesis de ADN y su estabilidad a altas temperaturas.
mCherry
La adición del marcador fluorescente mCherry (mCh) facilita el seguimiento de la enzima en distintos contextos experimentales, además de convertirse en un ejemplo didáctico del potencial de la biología sintética y de la ingeniería de proteínas.
En este workshop, OpenVent-mCh se entrega en forma de cellular reagent, es decir, bacterias secas que contienen la enzima en su interior, listas para ser utilizadas directamente en reacciones de PCR.
Cellular reagent
La técnica de cellular reagents es una alternativa innovadora y accesible a las enzimas comerciales utilizadas en biología molecular. En lugar de purificar la enzima, se utilizan directamente las células bacterianas secas que la producen, lo que permite disponer de un recurso estable, económico y fácil de transportar.
En este caso, las bacterias E. coli BL21 fueron cultivadas bajo condiciones controladas, inducidas para expresar la enzima polimerasa OpenVent fusionada con la proteína fluorescente mCherry, y luego procesadas para transformarse en un insumo estable a temperatura ambiente.
Estos tubos permitirán realizar reacciones de PCR en el marco del práctico, mostrando cómo los recursos abiertos y colaborativos pueden facilitar la enseñanza y el acceso a la biología molecular.
En la sección de protocolos generales puede encontrar el protocolo completo de como se realiza la técnica.
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